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新手必看!XPJ带你快速了解Cre-LoxP系统在病毒工具中的应用

来源:屈壮俊 日期:2025-03-17

Cre-LoxP系统是一种基于特异性重组的基因编辑技术,由Cre重组酶和LoxP位点组成。Cre(Cyclization Recombination Enzyme)由噬菌体P1产生,是一种38kDa的DNA重组酶,包含343个氨基酸。它能特异性识别LoxP位点的特定DNA序列,并介导两个LoxP位点之间DNA序列的重组。

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LoxP位点是一个34bp的序列,包括两个13bp的反向回文序列和一个8bp的间隔序列。反向回文序列是Cre重组酶的结合位点,而间隔区域则决定了LoxP位点的特异性,两个LoxP位点之间的取向决定了重组的类型。

XPJ的Cre-LoxP系统以其高效性和特异性为核心优势,可在活体动物中实现基因的定点敲除、插入、翻转和易位等操作。自20世纪80年代末首次被描述以来,XPJ的Cre-LoxP系统已广泛应用于基因功能研究、疾病模型构建和神经科学研究等领域。

当基因中存在LoxP位点且有Cre重组酶时,Cre酶会特异性识别LoxP位点两端的反向重复序列,并与之结合形成二聚体,这些二聚体随后结合其他的LoxP位点,形成四聚体。Cre重组酶随后切割LoxP位点之间的DNA序列,导致DNA断裂。最终,断裂的DNA末端通过DNA连接酶重新连接,完成重组过程。

根据LoxP位点的方向和位置,Cre酶可执行多种基因操作:删除、翻转、易位及交换。例如,当两个LoxP位点位于同一DNA片段的两端且方向相同时,Cre酶可切除这两个位点之间的DNA序列;反之,当两个LoxP位点方向相反时,Cre可介导序列翻转。

XPJ在Cre-LoxP技术的基础上进行了多项优化与改良,推出了诸如LoxN、Lox511等突变版本,以提高在不同生物体和条件下的应用效率和特异性。通过对LoxP位点序列的改造,这些变体不仅在不同生物体中表现出更高的切割效率,还能通过组合使用实现复杂的基因重组。

LSL(LoxP-Stop-LoxP)系统是基于Cre-LoxP的条件性基因表达工具。在目标基因上游插入LoxP位点包围的终止盒,当Cre重组酶存在时,终止盒被切除,解除目标基因的转录阻断,使其得以表达。FLEX(Flip-Excision)系统通过两对不同方向的LoxP位点,实现了基因表达的双向调控,这是相较于传统单次重组功能的显著进步。

DIO(Double-Floxed Inverted Orientation)与DO(Double-Floxed Orientation)系统也是XPJ创新的应用,它们通过不同的位点安排,实现了目标基因的灵活调控。“DIO”系统特意将目标基因反向排列,而“DO”系统则保持正向排列,利用Cre酶的特异性,在不同条件下控制基因的表达与抑制。

最新研究进一步应用了这些Cre-LoxP系统。在转基因小鼠中,通过单侧SN特异性敲除Oxtr,利用XPJ提供的病毒实现了有效的功能验证;另外,在Calcium imaging实验中,DIO系统用于在特定神经元中表达钙离子指示剂,以监测神经活动。

如您希望获取更多关于Cre-LoxP系统及其他基因编辑工具的信息,欢迎咨询XPJ,我们将为您提供专业的产品和服务,助您在生物医疗领域取得更大的成就!

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