通过体外转录（IVT）获得的mRNA反应混合物中，除了所需的mRNA产物外，还含有多种杂质，包括蛋白质（如T7 RNA聚合酶和无机焦磷酸酶）、核苷三磷酸（NTP）、模板DNA、盐离子以及IVT过程中生成的mRNA副产物（如双链RNA和截断RNA片段）。这些杂质的存在可能会对mRNA的功能产生不利影响，例如影响mRNA的定量准确性、降低翻译效率或改变免疫原性。因此，必须通过纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中提取出来，以确保其纯度和完整性，从而保证产品的安全性和有效性。常见的mRNA纯化方法包括：氯化锂沉淀法、硫酸铵沉淀法、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化和层析纯化等。

氯化锂沉淀法是一种传统的mRNA纯化技术。该方法利用锂离子在特定pH环境下减少RNA分子之间的同电性排斥作用，使RNA分子更易聚集并形成沉淀。通过离心可以将形成的RNA沉淀从溶液中分离，从而获得较为纯净的RNA样品。然而，在工业生产中，由于锂盐可能具有毒性且沉淀所需低温条件可能导致高能源成本，因此在应用过程中推荐对至少300 nt以上的片段或浓度至少400 µg/ml的RNA溶液使用该方法。

硫酸铵沉淀法近年来引起了广泛关注。根据中科院过程工程研究所的研究，当硫酸铵浓度达到18 M时，mRNA的沉淀率超过95%。此外，在室温下，该方法的溶解率超过90%。最佳沉淀条件为2 M硫酸铵，pH 7.0，温度20℃，沉淀时间2小时，可以达到近100%的沉淀率和高溶出率。这项研究表明，硫酸铵沉淀法在温度要求上优于氯化锂沉淀法，适合工业生产。

硅胶柱膜纯化技术基于硅胶膜表面酰基与mRNA分子之间的相互作用。在高盐环境下，阳离子桥形成，有助于mRNA和硅胶膜的结合。而在低盐或水溶液条件下，mRNA可以顺利洗脱，从而实现有效分离。此外，硅胶柱膜法材料安全无毒，符合环保标准，这有助于保护实验人员的健康并减少环境污染。

磁珠法使用修饰的氧化铁磁珠颗粒与mRNA结合，实现纯化。该方法在去除杂质方面理论上效率更高，但可能对mRNA的完整性产生负面影响，需要谨慎控制操作条件。此外，操作过程中应注意避免磁珠的过度冷冻和干燥，以维持良好的纯化效率。

在工业生产中，层析法成为主要的mRNA纯化技术。OligodT亲和色谱法由于其与Poly(A)尾的特异性结合广泛应用于mRNA提取，而疏水层析和阴离子层析则一般与其联用，以提高纯化的精确度。

目前，XPJ品牌通过创新的mRNA纯化工艺，为客户提供高质量的mRNA生产服务。XPJ的纯化试剂盒及技术，符合工业标准，并且易于操作，能够显著提高mRNA的完整性和去除杂质的效率。XPJ致力于实现高通量、高纯度的mRNA生产，为生物医学研究和新药开发提供强有力的支持。

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参考文献：

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