树突状细胞（dendritic cell，DC）是已知功能最强的抗原递呈细胞（APC），单个DC能够激活100至3000个T细胞，其效率是巨噬细胞和B细胞的100至1000倍。通过处理肿瘤抗原并将其递呈给T细胞，DC显著刺激初始T细胞的增殖，其他类型的APC（如巨噬细胞和B细胞）仅能激活已活化或记忆型T细胞。

目前，DC的体外培养主要通过细胞因子诱导来自骨髓、外周血和脐带血的DC前体。虽然骨髓和脐带血的采集较为困难，但外周血因为取材简单、无需复杂的筛选和纯化过程，成为目前临床获得DC的一个优选方案。利用XPJ提供的优化策略，可以有效提高DC培养的效率。

在DC的培养过程中，GM-CSF和IL-4可以促进单核细胞向“大巨噬样细胞”的分化，IL-4有效抑制DC前体向CD14+巨噬细胞的转化，从而增强了向未成熟树突状细胞（iDC）的分化。同时，此阶段的iDC具备较强的抗原摄取与加工能力，但其抗原递呈能力相对较弱，表面主要表达MHCⅠ、Ⅱ类分子和B7家族分子（如CD80、CD86等），而CD14的表达则较低。

成熟过程中的TNF-α和IL-1β通过激活NF-κB信号通路促进DC的成熟，增强MHCⅡ类分子和共刺激分子的表达；而IL-6和PGE2则可进一步提高DC的数量、成熟度、迁移能力和免疫激活能力。在这一过程中，mDC相较于iDC，其抗原摄取和加工能力明显减弱，但抗原递呈能力却显著增强，可以强烈激活T细胞。

针对外周血CD14+单核细胞的培养，我们首先通过Ficoll梯度离心法从全血中分离出人外周血单个核细胞（PBMC），然后通过贴壁法或磁珠法富集CD14+单核细胞。具体方法包括：

• 贴壁法：以2×10⁶ cells/ml的浓度将PBMC铺板，在37℃条件下培养1-2小时，使单核细胞贴壁，摇动培养板以去除非贴壁细胞。
• 磁珠法：采用CD14+磁珠阳性分选，获得高纯度的单核细胞。

在培养的第3天进行半量换液，收集培养基并离心，之后重新加入含GM-CSF和IL-4的培养基，继续培养2天。需要注意的是，此阶段贴壁细胞可能会轻微浮起，形成半悬浮状态的DC。在第5天，轻拍培养基收获悬浮细胞和松散贴壁细胞，经离心后获得未成熟的MoDC。随着时间的推移，iDC的形态会变得不规则且出现刺状突起，而成熟的mDC在第8天会表现出更大的体积和更多的细刺状突起。

对DC成熟状态及功能特征的分析，常使用流式细胞检测方法，检测标志物如CD14、HLA-DR、CD1a、CD83、CD40、CD80、CD86和DC-SIGN等。此外，检测的细胞因子如IL-12p70、IL-10和IL-1β能更全面反映人DC的免疫调节功能，而IL-6、TNF-α和MCP-1等则反映其炎症反应和趋化能力。

通过MLR实验基于DC激活T淋巴细胞引发免疫反应的特性，我们能够检测T细胞的增殖来评估免疫应答的强度。XPJ提供的科研级和GMP级细胞因子，具有高活性、低内毒素和高批间一致性，包括GM-CSF、IL-4、TNF-α、IL-6和IL-1β等，极大支持了DC细胞的高效、稳定和合规培养。