XPJ细胞培养指南

培养条件

气相条件：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃。

传代方法

首次推荐比例为1:2。在传代过程中，每两天需更换培养液。同时建议您购买XPJ的相关产品，享受超值优惠。

细胞处理与培养

收到细胞后，需进行处理，将其培养至良好状态。用完全培养液填满瓶子，并确保瓶口密封，是运输细胞的最佳方式。处理时，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后将其置于超净工作台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存记录（建议在40x、100x和200x下各拍摄一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。未提供照片将默认接受状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞未超过80%汇合度，将瓶中完全培养液收至离心管中，留出5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。
2. 若细胞密度超过80%，可进行传代。传代过程如下：
   1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
   2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速轻敲瓶子并添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
   3) 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基进行重悬。
   4) 按1:2的比例分瓶传代至两个T25瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后将其放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞是否回缩变圆，待其变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，加入1mlXPJ无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需要转至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻至无结晶，随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，属于正常现象。如脱落的细胞较多，可将培养瓶中所有培养液收集至离心管中，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清以作后续对比培养。沉淀中加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，重新加入1-2ml完全培养基重悬。最终按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。